Hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin


Hasnyálmirigyrák Absztrakt A gemcitabin egy olyan kemoterápiás gyógyszer, amelyet széles körben alkalmaznak a különböző hematológiai rosszindulatú betegségek kezelésében, és ez a standard kemoterápia a fejlett hasnyálmirigyrák kezelésére. A kombinált gemcitabin-rezsimeket pl. Doxorubicinnel klinikai vizsgálatokban vizsgálják különböző rákok, köztük vastagbélrák kezelésére.

Ezeknek a vizsgálatoknak a korlátozott sikere arra késztetett minket, hogy jobban megértsük a gemcitabin sejtpusztító mechanizmusát, ami drasztikusan javíthatja ezen szer terápiás potenciálját.

hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin a hólyag metasztatikus rákja

Összehasonlításképpen, gamma-besugárzást alkalmaztunk, amely robusztus sejtciklus letiltást és Cr VI -ot vált ki, ami egy erősen toxikus kémia, amely robusztus pfüggő apoptotikus választ indukál. A gemcitabin erős pfüggő apoptózist indukált, amely korrelál a pro-apoptotikus fehérjék, például a PUMA és a Bax felhalmozódásával.

Ez a p2l és a σ fehérje szintek drasztikus csökkenésével jár, ezáltal szignifikánsan érzékenyíti a sejteket az apoptózisra. In vitro és in vivo vizsgálatok azt mutatták, hogy a gemcitabinnak szüksége volt a PUMA transzkripcióra, hogy apoptotikus programot indítson.

Ez ellentétes a Cr VI által indukált apoptózissal, amely Bax-t igényelt és független volt a transzkripciótól. A klinikai vastagbél és a hasnyálmirigy rákszövetek vizsgálata hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin p53, p21, σ és Bax expressziót mutat a normál szövetekhez képest, de a PUMA fehérje közel hiányzik.

Ez magyarázatot adhat arra, hogy a gemcitabin csak korlátozott hatékonysággal rendelkezik a rák kezelésében. Eredményeink arra engednek következtetni, hogy a Bax-függő sejthalál-utat célozza meg, nem pedig a PUMA-útvonalat, és ez jelentősen javíthatja a betegek kimenetelét és prognosztizálhatja ezeket a rákokat. Fő A p53 tumorszuppresszor szabályozza a sejtciklus leállását, az apoptózist vagy az öregedést 1, 2, 3, 4, és az egyik leggyakrabban mutált fehérje a rákban.

A 13, 14 p53 közvetlenül kölcsönhatásba léphet a Bax-szal, közvetítve az utóbbi oligomerizációját, ami a mitokondriumok permeabilizációját indukálja.

Bár a Bax a pközvetített transzkripció-független sejthalál egyértelmű összetevője, a Bax- transzkripciót a p53 szabályozza, kiemelve az apoptózis indukálásához szükséges mechanizmusok átfedését. A gemcitabin deoxicytidin-analóg a fejlett hasnyálmirigy-rák kezelésében a szokásos kemoterápiás kezelésnek számít, jelenleg a II. Fázisú klinikai vizsgálatokban a vastagbélrák kezelésére. Bemutatjuk, hogy a növényi méregtelenítő kiegészítés alapul gemcitabin által indukált apoptózist p53 transzkripciós és PUMA-függő módon közvetítik.

A Cr Hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin expozíció egy erős pfüggő apoptotikus hatást közvetít, amely transzkripciótól független, de a Hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin fehérjét igényli. Az elsődleges vastagbél- vagy hasnyálmirigy-rákos páciens minta-analízise a psejtek szignifikáns p53 felhalmozódását és aktiválódását mutatta, azonban a PUMA-fehérje feltűnő hiánya ellentétben a Bax-szal.

Mivel a gemcitabint jelenleg korlátozott hatékonyságú hasnyálmirigy- és vastagbélrák kezelésére használják, eredményeink azt a lehetőséget vetik fel, hogy a Bax-függő apoptotikus útvonal célzottan javíthatja a beteg eredményét.

Eredmények A sejtvonalnak a gemcitabinnal vagy krómmal való expozíciója a p53 felhalmozódását indukálja, és erős apoptotikus választ közvetít. Az egyes szerekre gemcitabin vagy Cr VI való expozíció után jelentős sejthalált indukáló sejtállapotok megállapításához a sejtvonalak EC értékeit MTS-vizsgálattal határoztuk meg.

Mindegyik vegyület szignifikáns sejtpusztulást váltott ki a ptartalmú sejtvonalakban, de a phiányos sejtvonalakat 72 órával a kezelés után 1a. A γ -IR expozíció 10 Gy után nem volt szignifikáns változás a sejtvonal életképességében az adatokat nem mutatjuk be. Az immunoblot adatokkal egyetértésben a sejtek 48 órával a gemcitabinnal vagy Cr VI -val való érintkezést követően, de nem hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin -IR-vel a sejtek szorosának festődése a pt tartalmazó sejtekben növekvő mennyiségű aneksiin-V festést mutatott hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin.

A p53 a gemcitabin- és a Cr VI közvetített sejtpusztuláshoz szükséges.

Irénke története a hasnyálmirigyrákkal

Mindegyik vizsgálatot háromszor végeztük, és mindegyik kísérletet háromszor megismételtük. Az immunoblotot kaszpáz-3, kaszpáz-9, kaszpáz-2, p53 és p- aktin antitestek alkalmazásával végeztük. Minden károsodás esetén megfigyeljük a PUMA és a Bax fehérjék felhalmozódását pt tartalmazó sejtvonalakban 2a.

hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin helminták a gyermekek kezelésében

Az apoptózis indukciójával összhangban jelentős volt a BID felhalmozódása és hasítása, különösen a gemcitabinnal vagy Cr VI -val kezelt sejtekben. A Bcl-2 és a Bcl-xL anti-apoptotikus fehérjék szintjének csökkenése is nyilvánvaló volt ezekben a kezelt sejtekben. A BH3-család transzkripciója és fordítása a károsodási módtól függetlenül konzerválódik. A PUMA-t és a Bax- t minden pt tartalmazó sejtben indukálták, amelyek bármelyik kezeléseknek voltak kitéve.

Nem figyeltünk meg jelentős változást az ajánlati transzkripcióban, ami arra utal, hogy a BID stabilizálása és hasítása fontos volt a kezelés után apoptotikus funkciója szempontjából. Érdekes, hogy a sejtnövekedést megakadályozó γ -IR de nem apoptózis hasonló BH3- család gén expressziós profilokat eredményezett.

A p21 és a σ redukciója korrelál a DNS-károsodást követő apoptózis indukciójával, és mindkét szinergikus veszteség növeli ezt az érzékenységet A BH3-család expressziós képernyőt követve megvizsgáltuk a ciklinfüggő 1A p21 hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin szintjét és transzkriptumszintjét, valamint a σ sejtciklus-letiltó fehérjét mindkét pszabályozott fehérjét és védje a sejteket a pfüggő apoptózistól.

Ábraa gemcitabin és a Cr VI szignifikánsnak bizonyult.

HU0400006A2 - Antineopláziás kombinációs készítmények - Google Patents

Bár a króm-expozíció utáni p21 mRNS-expresszió elvesztését korábban már jelentették, 29, 30 a megfigyelés, hogy a gemcitabin kemoterápiás szer hasonlóan elnyomta a p21 expressziót, különösen akkor, ha úgy gondoljuk, hogy a σ expressziója a pet a G2-nél gátló sejt progresszióját kiegészítő fehérjét is természetes kezelés a pinwormok eltávolítására. A p21 és a σ differenciális expressziója befolyásolja a kemoterápiás szerekkel szembeni érzékenységet.

A p21, σ és β- aktin immunoblotolását végeztük. Mindegyik vizsgálatot négyszeres kísérletben végeztük, és hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin kísérletet háromszor megismételtük. Adataink 3c. Ezen knockdown vagy knockout sejtvonalak γ -IR-ra való expozíciója nem növelte szignifikánsan a sejtpusztulást még a legmagasabb γ -IR-dózisoknál is az adatokat nem ábrázoltuk.

A gemcitabin transzkripciót igényel az apoptózis kiváltására a Cr VI -val ellentétben A gemcitabin és a Cr VI mind a pfüggő sejthalált indukálta 1. Minden sejtvonalat előkezeltünk aktinomicin D-vel, amely gátolja a transzkripciót.

hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin papilloma pigmentfoltok

A Cr VI -indukált sejthalál transzkripciótól független volt. A gemcitabin transzkripciófüggő módon indukálja a sejthalált.

Hasnyálmirigyrák Absztrakt A hasnyálmirigy-rák túlnyomórészt halálos, és elsősorban gemcitabinnal kezelik, növekvő rezisztenciával. Ezért szükség van olyan új szerekre, amelyek növelik a tumor érzékenységét a gemcitabinnal szemben. A CG fokozta a gemcitabin-rezisztens hasnyálmirigy-rákos sejtek gemcitabinnal szembeni érzékenységét, és csökkentette az ATP-kötő kazetta-transzporter gének szintjét, különösen a 3-as számú multirezisztens protein MRP3 és az MRP4. A CG szignifikánsan javította a hasnyálmirigy rák érzékenységét a gemcitabinnal szemben, kiemelkedő tumorellenes hatással a gemcitabin-rezisztens hasnyálmirigyráksejtekre.

Teljes méretű kép A p53 és a p53 által szabályozott gének fehérje expressziós profilját vizsgáltuk, amikor a transzkripciót gátolták 4b. A gemcitabin-kezelt sejtek transzkripciós gátlása gátolta mindkét pro-növekedési fehérje p21 és σ és pro-apoptotikus fehérjék Bax és PUMA felhalmozódását. Cr VI expozíciót követően a Bax fehérje szintje kevéssé csökkent, annak ellenére, hogy az aktinomicin D továbbra is jelen van, amely egy bizonyos sejtvonalban megmaradt válasz, ami arra utal, hogy a gemcitabinnal ellentétben a már meglévő Bax lehetett.

Hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin VI expozíció után stabilizálódott, bár a pontos mechanizmus, amely ezt szabályozza, jelenleg nem ismert.

A transzkripciótól független apoptózis egyik kulcsfontosságú jellemzője a p53 transzlációja a citoplazmába. Az egyes ágensekre való expozíciót követően vizsgáltuk a p53 eloszlását a sejtvonalakban. A gemcitabinnal ellentétben ahol a p53 többsége nukleáris volta Cr VI expozíció a p53 jelentős felhalmozódását váltotta ki a citoplazmában 4c. Ez alátámasztja a 4a.

Ábrán látható megfigyelést, hogy a gemcitabin expozíció után a p53 a transzkripció szintjén közvetíti sejtsejt-hatását, míg a Cr VI pfüggő apoptózist indukál transzkripciótól független módon. A γ IR kezelés elősegítette a p53 jelentős nukleáris felhalmozódását, összhangban a potenciális pfüggő sejtciklus letartóztatási fenotípusával.

A gemcitabin által indukált apoptózis PUMA-függő, míg a Cr VI -indukált apoptózis Bax-függő Arra kérdőjeleztük meg, hogy ezek a pro-apoptotikus BH3 fehérjék különböző indukciós módjai tükrözik-e az apoptotikus eredmény tényleges különbségeit. A PUMA vagy Bax expresszió helyreállítása mindkét knockout sejtvonalban megmentette az összes fenotípust, és 72 órával a kezelés után generálta a vad típusú sejtekhez hasonló EC50 értékeket 5b. Ezek az eredmények alátámasztják azt az elképzelést, hogy bár a p21 vagy a σ elvesztése jelentősen növeli a sejtek stresszérzékenységét, a hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin pro-apoptotikus fehérjéi különös fontossággal bírnak ezeknek a válaszoknak a kiváltására.

A gemcitabinnak szüksége van a Szemölcsök és anyajegyek krémje sejtpusztulás indukálására.

hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin pinworm üzenet

Ezzel szemben Cr VI közvetíti a transzkripciótól független sejthalált, és csak a p53 és a Bax fehérje jelenlétét igényli. Megkérdeztük, hogy ez kimutatható-e in vivo, és hogy ezek a DNS-károsító szerek regressziót okozhatnak-e a kialakult tumorokban.

Ábratámogatva az in hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin adatokat. Minden egyes kezelési rendszernél nem találtunk semmilyen toxicitást vagy káros hatást. Ahogy az várható volt, mindegyik kontrollcsoport 50 μl PBS szignifikáns, gyors növekedést mutatott ugyanabban az időszakban. A gemcitabin-függő tumor regresszió korrelál a PUMA státuszával. A tapintható tumorokat az 1.

A tumorokat háromszor hetente megmértük, és a kezelés után 21 nappal összegyűjtöttük, vagy ha a tumorok elérték az mm3 térfogatot.

HUA2 - Antineopláziás kombinációs készítmények - Google Patents

Hét állatot használtunk csoportonként. P- értékek vannak megadva minden csoporthoz. Az in vitro eredmények megerősítése érdekében minden vad típusú HCT csoportból 21 nappal a kezelés után gyűjtöttük össze a tumorokat, és mértük a p53, p21, σBax és PUMA fehérje szintjét 6c. A kezeletlen kontroll tumorokkal ellentétben mind a Cr VI - mind a gemcitabin-kezelt daganatok szignifikáns p53, Bax és PUMA fehérjék felhalmozódását mutatják, összhangban a korábban leírt in vitro vizsgálatokkal.

hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin lapos szemölcsök a hüvely falain

Amint azt az in vitro vizsgálatok szerint előre jeleztük, neotropic helminthology impakt faktor a p21, mind a σ fehérjék elvesztették a DNS-károsodó rendszert követően. Kimutatták, hogy a vastagbél és a hasnyálmirigy rák nagy mennyiségű p53 mutációt tartalmaz 34, 35 és meghatározza, hogy a gyógyszer viszonylag alacsony hatékonysága összefüggésben lehet-e a p53, PUMA, Bax és p21 státuszával, a vastagbél vagy a hasnyálmirigy klinikai mintáival.

Immunfluoreszcens festést végeztünk az ADDINA2-hez ANXA2 főként sejtfelszíni fehérjekéntlehetővé téve számunkra, hogy azonosítsuk a p53 jelenlétét, bőségét és szubcelluláris lokalizációját a klinikai szekcióinkban.

  • Pathogenezis Absztrakt A hasnyálmirigyrák rossz prognózisa van, és gyakran előrehaladott állapotban diagnosztizálják, ami megnehezíti a kezelését.

Valamennyi összehangolt klinikai mintát tumor és normál szövet a hagyományos sebészi beavatkozás papillomavírus mycosis kaptunk, és fontos, hogy a rákos betegek egyike sem szenvedett semmilyen más betegségkezelést kemo- vagy radio-terápiát a műtéti eltávolítás előtt.

Jelentősen 7a. Ábra a vastagbél-tumor mintáinkban hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin magasabb pszinteket figyeltünk meg, és a normál hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin a pértéket kevéssé, a hipotézist pedig arra a következtetésre jutottuk, hogy ezen erősen stabilizált pnek ezekben a daganatokban való megcélzása jelentős tumor regressziót eredményezhet. A hasnyálmirigy Whipple-műtét jellegéből adódóan nem tudtuk elvégezni ezt az elemzést a hasnyálmirigy mintáinkra.

Amint azt a magas p53 fehérje expresszió alapján előre jeleztük, a vastagbél tumorszövetében szignifikánsan magasabb p21, σ és Bax expressziót észleltünkösszehasonlítva a normál vastagbélszövet mintákkal 7b.

Ezt a génexpressziós profilt is megfigyeltük hasnyálmirigy-tumor mintáink esetében.

Jelen tanulmány célja az ANO-k szerepének meghatározása a hasnyálmirigyrákban. A kísérleti eredmények klinikai jelentőségének meghatározásához az ANO9 prognosztikai értékét hasnyálmirigyrákos betegeknél értékelték. Emellett a magas ANO9-expresszió gyenge prognosztikai tényező a hasnyálmirigyrákos betegeknél. Fő A hasnyálmirigyrákot, amely a rákos halálozás egyik fő oka, nehéz kezelni, mert a klinikai megjelenés gyakran késik, és a betegség rezisztens a hagyományos kemoterápiával szemben Stocken et al, ; Ryan és mtsai,

Annak ellenére, hogy a teljes p53 fehérje szintje eltér, mind a vastagbél- hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin a hasnyálmirigy-daganatmintákban a PUMA expressziója hasonló mértékű, mint a normál szövetekben. Annak megállapításához, hogy a génexpresszió ezeken a párhuzamos mintákon korrelál-e a fehérje szintekkel, immunoblotanalízist végeztünk a HIF-1 a a tumor hipoxia markerea teljes és a szer15 foszforilált p53, PUMA, Bax p21 és σ 7c.

A normális vastagbélszövetmintáinkban vagy az extrahált normál hasnyálmirigymintáinkban kevés vagy sem teljes vagy foszforilált pt észleltünk. Ezzel szemben az összes vastagbél- és hasnyálmirigy tumormintában szignifikánsan magasabb a teljes p53 és a foszforilált szer15 p53 szintje, a vastagbélrák lizátumokban átlagosan ötször magasabb a teljes p53 fehérje és a hasnyálmirigy-rák lizátumokban háromszorosa összehasonlítva a normál normál értékekkel.

A tumormintákban is magasabb volt a HIF-1 a -szintje, amelyet jellemzően a szilárd rákos szövetekben találtak.

A génexpressziós adatokkal összhangban a tumorminták általában magasabb p21, σ és Bax szinteket mutattak a normál szövetekhez képest. Ezzel ellentétben, annak ellenére, hogy az egyes tumorokban szignifikáns mennyiségű p53, a PUMA fehérje szintje nagyon alacsony maradt. Az elsődleges vastagbél és a hasnyálmirigy daganatai megnövekedett pt mutatnak, és gyengített PUMA-fehérje expressziót mutatnak. A férgek, mint a fehér szálak alacsony nagyítás μ m és 40 μ m nagy nagyítás jelennek meg.

Az immunfluoreszcens festést a sebészi eltávolítás után azonnal a fagyasztott tumorszövetből végezzük. A metszeteket ANXA2-ra sejtfelszíni marker és pra festettük. A fehérjéket eltávolítottuk, denaturáltuk és az összes p53 immunobotográfiával analizáltuk. A pPUMA- és Bax- biotin-jelzett promoter szekvenciákat generáltuk leírjuk a mi hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin és módszereinkbenés a lizált egyező klinikai mintáinkkal inkubáltuk, lehetővé téve a p53 fehérje kötődését ezekhez a szekvenciákhoz.

A kötött pt ezután extraháltuk és immunoblottálással analizáltuk 7e. A sztreptavidin lehúzás után a nem befogott lizátumokat amelyek nem kötött fehérjéket tartalmaznak beleértve hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin nem kötődő pat is immunoblottálással is megtartottuk és elemeztük.

Vita Kimutattuk, hogy a gemcitabin és a króm expozíció mindegyike pfüggő apoptózist idéz elő, ellentétben a γ -IR által kiváltott DNS-károsodással, amely egy erős pszabályozott sejtciklus-megállási választ közvetít. A p21 és σ pro-növekedési gének expressziójában jelentős különbség mutatkozikahol γ -IR fokozza expressziójukat kiváltó letartóztatás a helminták gombák, míg a sejtpusztulást kiváltó szerek elnyomják az expressziójukat.

Bár a gemcitabin és a Cr VI mindegyike pfüggő apoptózist indukál, hatásmechanizmusuk nagyon eltérő. A gemcitabin transzkripció-függő apoptotikus választ közvetít a Cr VI -hoz képest, amely egy transzkripció-független apoptózis-választ indít.

A későbbi gén knockout, knockdown és helyreállítási vizsgálatok azt mutatták, hogy a kérdéses fehérje a PUMA. Ezzel ellentétben a króm-expozíció a már meglévő Bax-fehérje stabilizálódását eredményezi, amely a következő apoptózis kiváltásáért felelős; A PUMA nem vesz részt ebben az eseményben.

Úgy tűnik tehát, hogy a krómkezelés után a Bax és a PUMA felfelé állítása felesleges, bár a Bax-nak először a Cr VI -re történő sejt-expozíció előtt kell jelen lennie ahhoz, hogy a hatásos apoptotikus választ indítsa el.

Ez egybeesik azzal az elképzeléssel, hogy a pro-apoptotikus génexpresszió globális felszabályozása alapértelmezett válasz minden olyan DNS-károsodásra, amelyet le kell szüntetni, ha az apoptotikus eredmény nem kívánatos.

In vivo vizsgálatok hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin is kimutatták, hogy a gemcitabin indukálta a PUMA-függő tumor regressziót és a Cr VI által közvetített Bax-függő tumorpusztulást. Egy fontos figyelmeztetés a Cr VI expozícióra vonatkozik. Nyilvánvaló, hogy a Cr VI hatásos kémiai anyag, és mint minden jelenleg alkalmazott kemoterápiás szer, szisztémás injekció esetén jelentős mellékhatásokat okozhat.

Ezeket a vegyi anyagok közvetlen intratumális injekcióját követően nem figyelték meg, hasnyálmirigyrák xenograft gemcitabin meg kell jegyezni, hogy a felhasznált dózist rendszeresen tolerálták hosszabb ideig.

A doxorubicin-rezsim 37, 38 utáni kardiotoxicitás.

Tanulmány: A kannabinoidok hatékony kiegészítő kezelést jelenthetnek a hasnyálmirigyrákra

Ezekből a vizsgálatokból kitűnik, hogy a különböző szerek specifikusan aktiválhatják a p53 apoptotikus válasz különböző "karjait", és hogy mind a PUMA, mind a Bax célpontja rendkívül életképes megközelítés lehet a 8.

A p53 apoptotikus válasz javasolt karjai. Apoptotikus körülmények között pl. Gemcitabin vagy CrVI a p53 aktiválódik és felhalmozódik.